申请/专利权人：北京景达生物科技有限公司

申请日：2022-02-22

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN117286098B

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783;G01N33/543;A61K35/17;A61P31/12;A61P35/00;A61P37/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2024.01.12#实质审查的生效;2023.12.26#公开

摘要：本发明属于生物、生物技术领域，具体涉及一种高纯度NK细胞制备方案。为解决高纯度NK细胞难以制备的问题，本发明提供了一种高纯度NK细胞的制备方法，所述方法包括在使用包含IL‑2、IL‑15、IL‑12、CD137、血浆的激活培养基培养单个核细胞；所述培养在经过CD137、CD28、CD3预处理的细胞培养容器中进行。

主权项：1.一种NK细胞的制备方法，所述方法包括：1）使用8μgmLCD137、8μgmLCD28、8μgmLCD3预处理细胞培养容器；2）在1）获得的细胞培养容器中，使用激活培养基培养单个核细胞，所述激活培养基中含有IL-2、IL-15、IL-12、CD137、血浆，所述IL-2、IL-15、IL-12的浓度比是20:10:1，所述IL-2浓度为2000IUmL，所述IL-15浓度为1000IUmL，所述IL-12浓度为100IUmL，所述CD137浓度为5μgml，所述血浆百分比为5％；3）补充第一扩增培养基，所述第一扩增培养基中含有IL-2、IL-15、IL-12、血浆，在步骤1）的7天之内进行，所述IL-2、IL-15、IL-12的浓度比是20:10:1；所述IL-2浓度为2000IUmL，所述IL-15浓度为1000IUmL；所述IL-12浓度为100IUmL；所述血浆体积占比5％；4）补充第二扩增培养基，所述第二扩增培养基中含有IL-2、IL-15、IL-21，在步骤1）的第7-15天进行，所述IL-2、IL-15、IL-21的浓度比是40:20:1，所述IL-2浓度为2000IUmL，所述IL-15浓度为1000IUmL，所述IL-21浓度为50IUmL；所述制备方法在第0-15天使用CD3磁珠和CD14磁珠阴选NK细胞，CD3磁珠和CD14磁珠体积比为1:1，磁珠的浓度是20μL107细胞；所述CD137、CD28、CD3各自独立的是人源的单抗；所述激活培养基、第一扩增培养基、第二扩增培养基的基础培养基各自独立的是X-VIV015；所述方法制备得到的NK细胞纯度在99%以上。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京景达生物科技有限公司 一种高纯度NK细胞制备方案

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