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申请/专利权人：广西大学
摘要：本发明公开了一种碳化花粉固定化脂肪酶及其制备方法，本发明采用花粉为原料，经过无水乙醇的超声处理、去离子水的清洗、无水乙醇和甲醛的洗脱定型以及浓硫酸的碳化作用，获得了大小均一、结构规整，且具有精细表面结构的生物炭材料即碳化花粉；然后以碳化花粉为载体，经戊二醛交联脂肪酶，制备得到碳化花粉固定化脂肪酶。该碳化花粉固定化脂肪酶具有酶活性高、重用性好的特点，催化性能效果好，稳定性高、可多次重复使用；而且本发明碳化花粉固定化脂肪酶的制备方法简单，生产成本低。
主权项：1.一种碳化花粉固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将油菜花粉浸入无水乙醇中，进行超声处理1-2h，去离子水清洗3-4次，去除花粉的核心，以及清洗花粉表面；（2）将处理过的花粉加入到无水乙醇和甲醛的混合溶液中，搅拌1h，去离子水清洗3-4次，固定花粉形态；（3）按花粉∶H2SO4溶液为1g∶5ml的比例，将花粉加入到12molL的H2SO4溶液中，于80℃下搅拌4h，然后水洗调pH=7，置于烘干箱中60℃下干燥24h，研磨，过40目筛待用，不完全碳化花粉以获得完整的碳骨架；（4）按每1g碳化花粉对应加入7.5ml叔丁醇的比例，取叔丁醇加入碳化花粉，再加入叔丁醇体积25倍量、pH=7.5的PBS缓冲溶液，最后加入戊二醛充分搅拌半小时，使戊二醛与碳化花粉载体充分结合，每1g碳化花粉对应加入5ml戊二醛；（5）半小时后，按照每1g碳化花粉对应加入35mg脂肪酶的给酶量，加入脂肪酶溶液，继续搅拌4.5-6.5h,使酶与戊二醛充分结合；所述的脂肪酶为南极假丝酵母脂肪酶B；（6）反应结束前半小时加入体积为反应总体积14～15的饱和硫酸铵溶液，使蛋白充分析出；（7）清洗后于-50℃下冻干24h，即得碳化花粉固定化脂肪酶。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广西大学 一种碳化花粉固定化脂肪酶及其制备方法
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