申请/专利权人：贵州省烟草科学研究院;贵州贵安精准医学研究院股份有限公司

申请日：2019-03-06

公开（公告）日：2019-07-05

公开（公告）号：CN109964964A

主分类号：A01N65/38(20090101)

分类号：A01N65/38(20090101);A01N61/00(20060101);A01P3/00(20060101);A01P1/00(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2021.11.19#发明专利申请公布后的视为撤回;2019.08.02#实质审查的生效;2019.07.05#公开

摘要：本发明提供了一种烟草活性组分TES、提取方法及其应用，属于烟草产品加工提取技术领域。本发明通过对烟草原料进行预处理，并针对预处理后的烟草原料进行常温水提取，再对常温水提取沉淀物进行高温提取，再使用高温水提取上清液进行乙醇提取等三次操作，且使用高极性溶剂纯化水、乙醇作为提取溶剂，实验发现该目的组分具有抗菌功能，故具有抗菌药物开发潜力，为新药研发提供理论依据。

主权项：1.一种烟草活性组分TES、提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行烟草粗粉碎，最后再进行超微粉碎，得到烟草超微粉；2常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作，对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，得到烟草常温水提沉淀物和上清液，将上清液低温保存，冷冻干燥，得到烟草常温水提上清液冻干粉。步骤2中的提取溶剂为纯化水；3高温水提：在步骤2中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物。步骤3中的提取溶剂为纯化水；4酒精提取：在步骤3中得到的上清液中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清液，浓缩烘干得到烟草活性组分。步骤4中的提取溶剂为50-100％的酒精。

全文数据：烟草活性组分TES、提取方法及其应用技术领域本发明涉及烟草产品加工提取技术领域，具体涉及一种烟草活性组分TES、提取方法及其应用。背景技术烟草也称仙草，是一味传统的中药材，它的无机成分包括水、矿质元素；有机成分主要包括糖类、生物碱、杂环类、色素、酚类、萜类、有机酸类、脂质类、醇类、醛酮类等。其中，烟草中有机成分具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化活性、清除体内自由基等多种功能。目前，为了实现对烟草活性组分的提取，一般采用超临界提取、索氏提取、超声波提取方式。采用无水乙醇、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷作为提取溶剂。其中低极性溶剂如石油醚、正己烷，中极性溶剂丙酮、二氯甲烷，这些溶剂多为易挥发、易燃、有毒溶剂，对工业生产设备、人员等要求高，且得到的烟草活性组分的含量少，这就大大限制了烟草活性组分的进一步研究和应用。发明内容针对上述问题，本发明提供一种烟草活性组分TES、提取方法及其应用，以提高烟草活性组分的提取量。第一方面，本发明提供了一种从烟草中提取抗菌活性组分TES的方法，该方法包括以下步骤：1预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行烟草粗粉碎，最后再进行超微粉碎，得到烟草超微粉；2常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，得到烟草常温水提沉淀物和上清液，将上清液低温保存，冷冻干燥，得到烟草常温水提上清液冻干粉；步骤2中的提取溶剂为纯化水；3高温水提：在步骤2中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤3中的提取溶剂为纯化水。4酒精提取：在步骤3中得到的上清液中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清液，将收集的上清液进行浓缩烘干处理，得到烟草活性组分TES；步骤4中的提取溶剂为85％的乙醇。可选地，步骤1中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用200-400目筛网的粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。可选地，步骤2中加入提取溶剂的质量是所述烟草超微粉的质量的2-4倍。可选地，步骤2中提取操作是指将所述烟草超微粉和提取溶剂置于提取罐中，提取时间为0.5-3h。可选地，步骤2中的离心处理是指：离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。可选地，步骤3中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.2-2.4倍。可选地，步骤3中的离心处理是指将降温处理后的所述浓缩提取液置于离心瓶中，离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。可选地，步骤4中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.5-2.5倍。可选地，步骤4中的浸渍提取操作是指低温醇沉过夜。可选地，步骤4中的离心处理是指将所述浸渍提取物置于离心瓶中，离心温度为：3-5℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。第二方面，本发明提供了一种根据所述烟草活性组分在制备抗菌药物中的应用。本发明具有如下的有益效果：1、本发明通过对烟草原料进行预处理，并针对预处理后的烟草原料进行常温提取、使用高极性溶剂纯化水作为提取溶剂，可以将烟草原料中的烟草活性组分实现充分提取，提高烟草活性组分的提取含量；2、提取溶剂为乙醇、水溶液，成本低廉；3、本发明对烟草原料经过特殊方法提取的提取物可作为抗菌药物开发，具有广阔的应用前景。同时，本发明的烟草提取物的制备方法简单，适合工业化生产。附图说明图1所示的是本发明实施例1得到的烟草活性组分TES提取方法的流程图；图2所示的是本发明实施例2所得到的烟草活性组分TES抑制真菌-虫草菌生长示意图图中黑色箭头所指为烟草活性组分产生的抑菌圈；图3所示的是本发明实施例3所得到的烟草活性组分TES抑制细菌-大肠杆菌生长示意图图中黑色箭头所指为烟草活性组分产生的抑菌圈；图4所示的是本发明实施例4所得到的烟草活性组分TES抑制细菌-金黄色葡萄球菌生长示意图图中黑色箭头所指为烟草活性组分产生的抑菌圈；图5所示的是本发明实施例5所得到的烟草活性组分TES抑制细菌-枯草芽孢杆菌生长示意图图中黑色箭头所指为烟草活性组分产生的抑菌圈；上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步具体描述。应该指出，以下具体说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。实施例1：烟草抗菌活性组分的提取1、烟草抗菌活性组分的提取步骤如下：1预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行烟草粗粉碎，最后再进行超微粉碎，得到烟草超微粉；2常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，得到烟草常温水提沉淀物和上清液，将上清液低温保存，冷冻干燥，得到烟草常温水提上清液冻干粉；步骤2中的提取溶剂为纯化水；3高温水提：在步骤2中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤3中的提取溶剂为纯化水。4酒精提取：在步骤3中得到的上清液中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清液，将收集的上清液进行浓缩烘干处理，得到烟草活性组分TES；步骤4中的提取溶剂为85％的乙醇。实施例2：烟草活性组分抑制真菌-虫草菌生长的实验1、实验目的：通过抑菌实验,可以测定烟草提取物的抑菌效力。2、实验方法：琼脂打孔法3、实验原理：抗菌物质从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗菌物质抗菌能力的强弱。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。4、实验菌株：虫草菌5、实验步骤:1配置固体培养基：酵母提取物0.2g、蛋白胨0.5g、葡萄糖0.2g、磷酸氢二钾0.1g、硫酸镁0.05g、琼脂1.5g定容至100mL，高压灭菌，待温度合适时，在超净工作台内倒平板，待平板凝固后使用；2虫草菌接种：将虫草菌接种到事先制备好的固体培养基培养皿内，用涂布棒涂布均匀，盖好培养皿；3琼脂打孔：在涂布有菌液的培养皿上用1mL枪头打三个孔；4添加烟草活性组分：配置浓度为0.2gmL的烟草活性组分溶液，用移液枪移取200μL该溶液至菌液培养皿的三个孔中，并做好标记；5培养：将4中培养皿至于27℃的培养箱中，培养48-96小时；6实验结果如图2所示：利用观片机查看培养结束后的培养皿，孔的周围没有生长出菌种，因此表明烟草活性组分对虫草菌具有抑制作用。实施例3：烟草活性组分抑制细菌-大肠杆菌生长的实验1、实验目的：通过抑菌实验,可以测定烟草提取物的抑菌效力。2、实验方法：琼脂打孔法3、实验原理：抗菌物质从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑制作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗菌物质抗菌能力的强弱。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。4、实验菌株：大肠杆菌5、实验步骤：1配置固体培养基：酵母提取物0.2g、蛋白胨0.5g、葡萄糖0.2g、琼脂1.5g定容至100mL，高压灭菌，待温度合适时，在超净工作台内倒平板，待其凝固后使用；2大肠杆菌接种：将大肠杆菌接种到固体培养基培养皿内，用涂布棒涂布均匀，盖好培养皿；3琼脂打孔：在涂布有菌液的培养皿上用1mL枪头打三个孔；4添加烟草活性组分：配置浓度为0.2gmL的烟草活性组分溶液，用移液枪移取200μL该溶液至菌液培养皿的三个孔中，并做好标记；5培养：将培养皿放入37℃培养箱中，培养48-96小时；6实验结果如图3所示：在观片机下观察到孔的周围没有生长出菌种，表明烟草活性组分对大肠杆菌具有抑制作用。实施例4：烟草活性组分抑制细菌-金黄色葡萄球菌生长的实验1、实验目的：通过抑菌实验,可以测定烟草提取物的抑菌效力。2、实验方法：琼脂打孔法3、实验原理：抗菌物质从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗菌物质抗菌能力的强弱。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。4、实验菌株：金黄色葡萄球菌5、实验步骤：1配置固体培养基：酵母提取物0.2g、蛋白胨0.5g、葡萄糖0.2g、琼脂1.5g定容至100mL，高压灭菌，待温度合适时，在超净工作台内倒平板，凝固后使用；2金黄色葡萄球菌接种：将金黄色葡萄球菌接种到固体培养基培养皿内，用涂布棒涂布均匀，盖好培养皿；3琼脂打孔：在涂布有菌液的培养皿上用1mL枪头打三个孔；4添加烟草活性组分：配置浓度为0.2gmL的烟草活性组分溶液，用移液枪移取200μL该溶液至菌液培养皿的三个孔中，并做好标记；5培养：将培养皿放入培养箱中37℃，培养48-96小时；6实验结果如图4所示：观片机查看培养结束后的培养皿，孔的周围没有生长出菌种，表明烟草活性组分对金黄色葡萄球菌具有抑制作用。实施例5：烟草活性组分抑制细菌-枯草芽孢杆菌生长的实验1、实验目的：通过抑菌实验,可以测定烟草提取物的抑菌效力。2、实验方法：琼脂打孔法3、实验原理：抗菌物质从孔洞向琼脂培养基扩散渗透，通过对试验菌的抑杀作用而影响细菌生长繁殖，使菌落形成抑菌圈，依抑菌圈的大小确定抗菌物质抗菌能力的强弱。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。本试验适用于抑菌剂与溶出性抑菌产品的鉴定。4、实验菌株：枯草芽孢杆菌1配置固体培养基：酵母提取物0.2g、蛋白胨0.5g、葡萄糖0.2g、琼脂1.5g定容在100mL，高压灭菌，待温度合适时，在超净工作台内倒平板，凝固后使用；2枯草芽孢杆菌接种：将枯草芽孢杆菌接种到固体培养基培养皿内，用涂布棒涂布均匀，盖好培养皿；3琼脂打孔：在涂布有菌液的培养皿上用1mL枪头打三个孔；4添加烟草活性组分：配置浓度为0.2gmL的烟草活性组分溶液，用移液枪移取200μL该溶液至菌液培养皿的三个孔中，并做好标记；5培养：将培养皿放入培养箱中37℃，培养48-96小时；6实验结果如图5所示：观片机查看培养结束后的培养皿，孔的周围没有生长出菌种，因此表明烟草活性组分对枯草芽孢杆菌具有抑制作用。以上所述，仅为本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的核心技术的前提下，还可以做出改进和润饰，这些改进和润饰也应属于本发明的专利保护范围，与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在权利要求书范围内。

权利要求：1.一种烟草活性组分TES、提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行烟草粗粉碎，最后再进行超微粉碎，得到烟草超微粉；2常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作，对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，得到烟草常温水提沉淀物和上清液，将上清液低温保存，冷冻干燥，得到烟草常温水提上清液冻干粉。步骤2中的提取溶剂为纯化水；3高温水提：在步骤2中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物。步骤3中的提取溶剂为纯化水；4酒精提取：在步骤3中得到的上清液中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清液，浓缩烘干得到烟草活性组分。步骤4中的提取溶剂为50-100％的酒精。2.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤1中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用200-400目筛网的粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。3.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤2中加入提取溶剂的质量是所述烟草超微粉的质量的2-4倍。4.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤2中提取操作是指将所述烟草超微粉和提取溶剂置于提取罐中，提取时间为0.5-3h。5.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤2中的离心处理是指：离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。6.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤3中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.2-2.4倍。7.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤3中的离心处理是指将降温处理后的所述浓缩提取液置于离心瓶中，离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。8.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤4中的离心处理是指将所述浸渍提取物置于离心瓶中，离心温度为：3-5℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpmmin。9.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗菌活性组分的方法，其特征在于：所述步骤4中的浸渍提取操作是指低温醇沉过夜。10.根据权利要求1所述烟草活性组分在制备抗菌药物中的应用。

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