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申请/专利权人：深圳大学
摘要：本发明涉及核酸测序领域，具体涉及一种基于PacBio三代测序平台的mRNA3’末端文库构建方法，解决了mRNA的3′末端修饰问题。通过Sera‑MagOligodTBead方法纯化mRNA，并在纯化后的mRNA3’末端添加接头序列，以及利用Templateswitcholigo的方法得到包含转录物的完整5'端和3’端的反转录cDNA，并且选择3’通用引物和5'通用引物进行PCR扩增，从而获得完整的双链cDNA，T‑A克隆并测序发现能够检测到polyA尾端；最后，在3’通用引物和5'通用引物的5’端加上Index序列并进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行PacBioSequelⅡCCS测序，产出符合要求且稳定的测序数据。本发明可以检测polyA尾3′最末端的序列，测序准确率高。
主权项：1.一种基于PacBio三代测序平台的mRNA3’末端文库构建方法，其特征在于，方法如下：通过Sera-MagOligodTBead方法纯化mRNA，并在纯化后的mRNA3’末端添加接头序列，以及利用Templateswitcholigo的方法得到包含转录物的完整5'端和3’端的反转录cDNA，并且选择3’通用引物和5'通用引物进行PCR扩增，从而获得完整的双链cDNA，T-A克隆并测序发现能够检测到polyA尾端；最后，在3’通用引物和5'通用引物的5’端加上Index序列并进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行PacBioSequelⅡCCS测序，产出符合要求且稳定的测序数据。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳大学 一种基于PacBio三代测序平台的mRNA 3’末端文库构建方法
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