申请/专利权人：中国农业大学

申请日：2021-12-03

公开（公告）日：2024-06-04

公开（公告）号：CN114181891B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N5/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.04#授权;2022.04.01#实质审查的生效;2022.03.15#公开

摘要：本发明涉及一种小鼠睾丸类器官的高效培养方法，属于生物工程领域。该方法包括如下：1在自行设计了一个制备类器官培养模具，在此模具的基础上，制备类器官培养的凝胶模具。2对睾丸原代细胞进行分离，分步添加诱导分化的关键因子，3将分离的睾丸单细胞悬液加入到步骤1得到的凝胶模具上进行体外诱导培养，获得了数量可观，且具有睾丸官腔结构且能启动减数分裂的睾丸类器官。本申请不仅为体外研究睾丸各细胞类群的相互作用及精子发生提供了优良的模型，并且可以为培养人睾丸类器官提供参考方法。

主权项：1.一种小鼠睾丸类器官的高效培养方法，其特征在于，包括如下步骤：a利用3D打印技术打印出具体特定尺寸的培养模具，b在此模具的基础上，制备类器官培养的凝胶模具，c将小鼠睾丸组织消化成单细胞悬液，用培养基重悬细胞，将其接种于凝胶模具的小孔之中，利用三种优化的培养基，在34℃，5％二氧化碳环境中培养16天；类器官培养第1-3天使用培养基I，所述培养基I的成分和浓度为表1； 成分 终浓度 基础培养基 1X 转铁蛋白 100μgmL BSA 2mgmL 胰岛素 20μgmL L-谷氨酰胺 2mM 维生素C 10-4M 2-巯基乙醇 55μM 脂肪酸混合液 100X 人GDNF 20ngmL 人bFGF 5ngmL 小鼠EGF 10ngmL 人血小板裂解液 3％ N2补充物 100X 类器官培养第4-9天使用培养基II，所述培养基II的成分和浓度为表2； 成分 终浓度 基础培养基 1Х 视黄酸 10-6M 小鼠BMP4 20ngmL 小鼠activinA 100ngmL 睾丸提取物 300μgmL 类器官培养第10-16天使用培养基III，所述培养基III成分和浓度为表3； 成分 终浓度 基础培养基 1Х 睾酮 10μM FSH 200ngmL hCG 4.5IUmL BPE 50μgmL 睾丸提取物 300μgmL 所述基础培养基组分为α-MEM，碳酸氢钠NaHCO3，Knockout血清替代物KSR，青霉素，链霉素，如表4成分终浓度α-MEM1ⅹ碳酸氢钠3.7mgmLKSR10％青链霉素溶液1％。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业大学 一种小鼠睾丸类器官的高效培养方法

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