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申请/专利权人：墨卓生物科技(浙江)有限公司;华中科技大学
摘要：本发明属于生物医药技术领域，涉及一种单细胞测序文库构建方法、获得的测序文库及应用，该文库构建方法利用细胞膜或细胞核膜上广泛存在的糖蛋白，以及多种能够非特异性结合糖蛋白的链霉亲和素融合蛋白，实现对多个样本的同时和无偏标记，从而构建出高质量的单细胞混样文库。本发明相较已有的基于靶向细胞表面抗原的抗体或磷脂的单细胞混样标记方法更加具有优势，对单细胞和单细胞核的标记及混样都可以较好适用，极大地丰富了适用的样本类型和使用场景。本发明可以实现多样本混样以及超高通量单细胞过载上机，极大地降低单细胞转录组实验的成本，进一步提高了单细胞转录组测序技术的应用性和普适性。
主权项：1.一种单细胞测序文库构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：S1.与糖蛋白结合的融合蛋白的制备；S2.与糖蛋白结合的融合蛋白与生物素化寡核苷酸孵育形成标记复合物；S3.不同样本的单细胞或单细胞核悬液的制备；S4.使用带不同生物素化寡核苷酸序列的标记复合物分别标记不同的单细胞或单细胞核样本；S5.将标记过的不同单细胞或单细胞核样本按照一定比例进行混合，得到多样本来源单细胞或单细胞核悬液；S6.使用混合后的多样本来源单细胞或单细胞核悬液进行液滴生成和反转录；S7.对液滴中cDNA进行回收、扩增和分离纯化，获得混样cDNA和转录组cDNA；S8.使用步骤S7中获得的混样cDNA和转录组cDNA构建文库；其中，所述融合蛋白包括如下任一种：基于FBXO2蛋白的GYR突变体和链霉亲和素的融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.22所示；基于FBXO2蛋白的PPRYR突变体和链霉亲和素的融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.23所示；基于FBXO6蛋白和链霉亲和素的融合蛋白，氨基酸序列如SEQIDNO.24所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 墨卓生物科技(浙江)有限公司 华中科技大学 一种单细胞测序文库构建方法、获得的测序文库及应用
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