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申请/专利权人：佛山科学技术学院
申请日：2024-01-05
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222594A
主分类号：C12N15/70
分类号：C12N15/70;C07K19/00;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明公开了一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法，本申请通过将植物乳杆菌L.plantarum中的14氨基酸组成的抗菌肽基因克隆到含有类弹性蛋白ELP标签的载体pET‑23a‑ELP上，构建成Elamp14质粒。结合自诱导培养技术并使用可逆相变循环ITC纯化法获得高纯度的Elamp14蛋白。经过对其功能分析，发现该蛋白对食品中的有害菌具有抑菌活性。这将减少抗生素的使用，是未来食品保鲜剂和抗生素的优秀替代品。同时，该蛋白具有耐热性，可以更广泛应用到现代食品工业生产中。本技术能够显著降低生产成本，纯化方法简便，适用于工业放大，具有良好的应用前景。
主权项：1.一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：构建Elamp14重组质粒：以植物乳杆菌的基因组为模板，将植物乳杆菌的14肽基因作为目的基因，并在其前面添加6×His标签进行PCR扩增，得到PCR产物；对pET-23a-ELP进行双酶切获得线性载体；通过无缝克隆连接构建Elamp14重组质粒，转化进DH5α大肠杆菌感受态，在含有AMP抗性的平板筛选，选出单克隆并接种到10mL含AMP抗生素的LB培养基中培养，获得Elamp14重组质粒；诱导表达Elamp14蛋白：将重组质粒转化至大肠杆菌BL21感受态细胞，在含有AMP抗性的平板筛选，从平板中挑单克隆接种于50mL含AMP抗生素的LB培养基扩培；取40mL菌液加入到2L含AMP抗性的自诱导培养基，将培养后菌液经离心收集，弃上清收集菌体，再加入缓冲液通过均质高压将细胞破碎，离心处理，获得含有Elamp14蛋白的上清液；纯化：将含有Elamp14蛋白的上清液经过可逆相变循环法纯化处理，得到抗菌多肽偶联类弹性蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 佛山科学技术学院 一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法与应用
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