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申请/专利权人：四川大学
摘要：本发明公开了一种构建CRISPR文库的方法，涉及基因筛选技术领域，包括以下步骤：S1、设计合成sgRNA文库；S2、载体质粒的构建；S3、慢病毒包装；S4、慢病毒转导条件优化；S5、感染宿主细胞及抗性筛选。通过本发明的方法，在建库初阶段，通过设计不同Barcode序列标记不同生物功能基因的sgRNA文库，并针对特定Barcode序列进行PCR扩增，便可获得不同生物功能基因的CRISPR子文库，从而在控制sgRNA文库合成成本的同时降低CRISPR文库应用的成本。在构建文库载体质粒时，设计加入一段红色荧光蛋白序列mCherry，用于标记被感染的宿主细胞，通过流式细胞术分析可及时、精准、高效地获得细胞感染比例，可极大简化感染宿主细胞实验条件的优化过程。
主权项：1.一种构建CRISPR文库的方法，其特征是：包括以下步骤：S1、设计合成sgRNA文库；S2、载体质粒的构建；S3、慢病毒包装；S4、慢病毒转导条件优化；S5、感染宿主细胞及抗性筛选。
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百度查询： 四川大学 一种构建CRISPR文库的方法
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