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申请/专利权人：江苏杜瑞制药有限公司

摘要：本发明提供了一种纳呋拉啡的生物样品分析方法，是通过高效、快速、灵敏的液相‑质谱联用系统LC‑MSMS方法对纳呋拉啡进行分析。此方法采取了固相萃取法对生物样本进行前处理，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中纳呋拉啡的浓度。本发明采取了固相萃取法纯化样品，使得检测限非常低，可达0.1pgmL，本发明方法可专属、灵敏、快速地测定生物样品中纳呋拉啡的浓度，为测定纳呋拉啡在人或动物体内的药代动力学中纳呋拉啡的检测提供了简便的分析方法。

主权项：1.一种生物样品中纳呋拉啡的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱-质谱联用进行测定，包括以下步骤：S1、标准曲线样品配制；S2、质控样品配制；S3、内标溶液配制，内标溶液为1ngmL的纳曲酮；S4、生物样品前处理，具体包括如下步骤：S41、将固相萃取小柱活化；S42、取用1mL生物样本与500μL内标工作液涡旋混合后，分2次上样至已活化完成的固相萃取小柱，采用负压抽滤装置对样本进行抽滤，摒弃样本抽滤液；S43、采用2mL纯水作为淋洗液分2次对已上样的固相萃取柱进行淋洗，采用负压抽滤装置对淋洗液进行抽滤，摒弃抽滤后的淋洗液；S44、采用1mL0.1％甲酸甲醇溶液作为洗脱液对已淋洗完成的固相萃取柱进行洗脱，采用负压抽滤装置对洗脱液进行抽滤，收集抽滤后的洗脱液；S45、对收集完成的洗脱液进行氮吹处理，直至洗脱液完全吹干；S46、复溶吹干后的EP管，涡旋至少2分钟；S47、取复溶后样品至进样管中，4℃，13000-15000rpm离心5-10分钟后进样分析；S5LC-MSMS方法检测；通过LC-MSMS方法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中纳呋拉啡的浓度；S5中LC-MSMS方法的色谱及质谱条件如下：色谱条件：液相型号为SHIMADZULC-20A或SHIMADZULC-30A；色谱柱为SHIMADZUShim-packGISTC18-AQ，2.1*50mm，3μm；流动相A相为0.1％甲酸水溶液；流动相B相为0.1％甲酸甲醇；梯度洗脱条件包括如下五个阶段：第一阶段0.00-0.80min：起始流动相比例A:B＝90:10；第二阶段0.80-1.50min：流动相比例由A:B＝90:10B相缓慢上升至A:B＝30:70；第三阶段1.50-2.60min：流动相比例A:B＝30:70；第四阶段2.60-2.61min：流动相比例由A:B＝30:70B相迅速下降至A:B＝90:10；第五阶段2.61-3.50min：流动相比例A:B＝90:10；流速为：0.8mLmin；进样量为：5-10μL；质谱条件：ABSCIEXAPI6500+或QTRAP6500型号质谱，ESI源，正离子，离子喷射电压为5500V，温度550-600℃，雾化气压力为55psi，解簇电压压力为55psi，气帘气体压力为35-40psi，扫描方式为多重反应监测，纳呋拉啡和内标的质谱参数为：纳呋拉啡的质谱参数为：Q1，477.4；Q3，308.1；Dwelltime，200；DP，80；EP，10；CE，42；CXP，18；纳曲酮的质谱参数为Q1，342.4；Q3，270.1；Dwelltime，200；DP，95；EP，10；CE，37；CXP，15；其中，Q1—母离子amu；Q3—子离子amu；Dwelltime—驻留时间msec；DP—去簇电压v；EP—射入电压v；CE—碰撞能量v；CXP—碰撞室射出电压v；所述生物样品选自犬的血浆或血清样品、大鼠的血浆或血清样品、猴的血浆或血清样品或受试者的血浆或血清样品；所述固相萃取法的固相萃取小柱为：Phenomenex，StrataTM-X30mg，1cc3。

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