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申请/专利权人：苏州凯劳生物科技有限公司
摘要：本发明属于蛋白质或多肽的结构测定技术领域，尤其涉及一种使用毛细管电泳仪电离还原蛋白二硫键并确定其自由巯基比例的方法。该方法包括如下步骤：1自由巯基烷基化步骤；2酶切步骤；3酶切产物还原后烷基化步骤；4分析检测步骤。本发明提供的分析方法能够在一个测试中同时定量检测蛋白质中每一个半胱氨酸的自由巯基比例,为蛋白质二硫键的定量检测提供了一种新方法。
主权项：1.一种使用毛细管电泳仪电离还原干扰素α1b蛋白二硫键并确定其自由巯基比例的方法，其包括如下步骤：1自由巯基烷基化步骤：在样品未做任何处理的情况下，加入烷基化试剂1反应后得烷基化产物1，所述烷基化试剂1为N-乙基马来酰亚胺，所述样品浓度为1-20mgmL；2酶切步骤：向烷基化产物1中加入蛋白酶，将烷基化产物1酶解成肽段，使每一个肽段最多含有一对二硫键，所述蛋白酶为Glu-C蛋白酶；3酶切产物还原后烷基化步骤：将步骤2得到的酶切产物加入烷基化试剂2，使用毛细管电泳仪加以电离，使得二硫键被还原为自由巯基，并被烷基化试剂2烷基化，得到烷基化产物2，所述电离条件为：毛细管石英裸鼓泡毛细裸管直径100μm或以上、长度30-100cm，电离背景缓冲液为终浓度50％乙腈和1％甲酸，电压-15vcm毛细管长，1-2分钟，15vcm毛细管长，1-2分钟，使用铂电极；所述烷基化试剂2为碘乙酰胺；4分析检测步骤：使用液质联用仪对步骤3中的酶切产物和烷基化产物2两份样品进行数据采集，并对采集到的数据进行数据分析。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 苏州凯劳生物科技有限公司 一种使用毛细管电泳仪电离还原蛋白二硫键并确定其自由巯基比例的方法
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