申请/专利权人：内蒙古农业大学

申请日：2021-10-25

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN113817722B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10;C12Q1/686;C12Q1/6888;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.14#授权;2022.01.07#实质审查的生效;2021.12.21#公开

摘要：本发明涉及从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，其通过柱式深加工产品基因组DNA抽提试剂盒从骆驼乳粉中提取纯化DNA，所述方法包括裂解操作时，采用裂解液GMPBuffer和冰冻300μl异丙醇以提高裂解成功率，最终得到含有纯化DNA的核酸溶液。本发明还涉及一种骆驼乳粉的检测方法，通过上述方法从乳粉中获得含有纯化DNA的核酸溶液，然后采用Nanodrop微量分光光度计测定核酸溶液的浓度和纯度，采用PCR扩增方法对核酸溶液的总基因组进行物种鉴定。本发明的方法操作简单，可从体细胞含量很低的乳粉中获得纯化的核酸，后续用于PCR扩增实验中。本发明的方法具有广阔的应用前景。

主权项：1.从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，其特征在于通过柱式深加工产品基因组DNA抽提试剂盒从骆驼乳粉中提取纯化DNA，所述试剂盒是生工生物工程（上海）股份有限公司销售的B518264号产品，所述方法包括以下步骤：（1）称取600-700mg骆驼乳粉样品于2ml离心管中，加入1ml裂解液GMOBuffer和20μlProteinaseK蛋白酶，震荡混匀，在65℃水浴锅裂解1h；（2）水浴结束后，离心吸取上清液，12000rpm下离心3min，转移上清液至新的2ml离心管中，向上清液加入400μl氯仿，充分混匀后离心吸取上清液，在12000rpm下离心5min，再转移上清液至新的2ml离心管中，再次加入400μl氯仿，充分混匀再次离心取上清液，在12000rpm下离心5min，转移上清液至新的2ml离心管中；（3）向步骤（2）得到的产物中加入等体积的裂解液GMPBuffer，充分混匀后加入300μl异丙醇，充分混匀后室温静置30min，所述异丙醇保存于-20℃；（4）将步骤（3）得到的产物取700-800μl转移至吸附柱中，室温放置2min后离心，在12000rpm下离心30s，再将滤液倒入吸附柱后再离心弃滤液，在12000rpm下离心30s，将吸附柱放回收集管中；（5）向吸附柱中加入500μl洗涤液WashSolution后离心弃滤液，在12000rpm下离心30s，将吸附柱放回收集管中；（6）重复操作步骤（5）；（7）将吸附柱放回收集管中，空管离心弃滤液，离心速度为12000rpm，离心时间为2min；（8）取出吸附柱，放入一个新的2ml离心管中，打开盖子在56℃干燥箱中干燥10min；（9）在吸附膜中央加入50μlpH8.0的洗脱液TEBuffer洗脱核酸，室温静置3-5min，使核酸充分的从吸附膜上剥离，进行离心，离心速度为12000rpm，离心时间为2min，得到含有纯化DNA的核酸溶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 内蒙古农业大学 从骆驼乳粉中提取纯化DNA的方法，及应用所述方法的骆驼乳粉的检测方法

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