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申请/专利权人：山东大学
申请日：2024-03-21
公开（公告）日：2024-06-11
公开（公告）号：CN118166042A
主分类号：C12N15/90
分类号：C12N15/90;C12N15/70
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.28#实质审查的生效;2024.06.11#公开
摘要：本发明提供了一种在微生物基因组上多拷贝整合目的基因的方法及应用。本发明中所述方法，将mini‑Tn5转座系统和FLPFRT位点结合，通过诱导表达及共孵育培养获得重组菌株，在不同的大肠杆菌菌株中实现目标DNA的随机多拷贝整合。在没有施加选择压力的情况下，能够稳定地表达多达19个egfp基因拷贝和12个PHB合成基因拷贝。
主权项：1.一种在微生物基因组上多拷贝整合目的基因的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1构建含有转座酶Tn5识别位点ME、位点特异性重组酶FLP的识别位点FRT及目的基因和标记基因的第二质粒，并将第二质粒转化至菌株MFDpir中获得供体菌株；2构建可以诱导表达转座酶Tn5的第一质粒，并转化至出发菌株获得受体菌株；3诱导受体菌株表达转座酶Tn5获得诱导后受体菌株；4将诱导后受体菌株与供体菌株混合后共孵育获得结合子；5删除步骤4中的第一质粒，并引入含有位点特异性重组酶FLP的第三质粒；6在41℃-44℃条件下培育步骤5所得菌株，去除第三质粒；7将步骤6所得菌株作为新一轮的目标菌株，重复步骤2-6；8重复步骤7≥2次获得多拷贝整合目的基因菌株；优选2-6次；更优选为6次。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东大学 一种在微生物基因组上多拷贝整合目的基因的方法及应用
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