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申请/专利权人：广东医科大学附属医院
申请日：2024-03-12
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN118207256A
主分类号：C12N15/85
分类号：C12N15/85;C12N15/12;A01K67/0276
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.18#公开
摘要：本发明公开了一种嗜碱性粒细胞缺失小鼠模型及其构建方法与应用，属于转基因技术领域。本发明利用CRISPRCas9基因编辑技术，以gRNA引导Cas9蛋白和靶向载体定点剪切并同源重组修复，在Mcpt8基因第2～4外显子的上游和下游分别插入LoxP位点，使得打靶成功率更高。本发明的特异性敲除小鼠Mcpt8基因，使得构建得到的小鼠模型缺失嗜碱性粒细胞且存活率高，存活率100％，存活周期长，可以存活六个月以上，能够有效保证实验的顺利进行。通过本发明特异性敲除小鼠Mcpt8基因的构建方法得到的缺失嗜碱性粒细胞的小鼠模型，在自身免疫性疾病的研究中具有很好的应用前景。
主权项：1.一种条件性敲除Mcpt8基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1基于CRISPRCas9技术设计靶向Mcpt8基因的gRNA；2设计含有LoxP位点的靶向载体；3将Cas9蛋白、gRNA和靶向载体混合注射至小鼠的受精卵中；4将步骤3的受精卵移植至假孕小鼠子宫内，繁育出F0代小鼠，对F0代小鼠进行基因型鉴定，筛选阳性F0小鼠；5将阳性F0小鼠与特异性工具鼠交配并进行基因型鉴定，获得F1代双基因杂合子小鼠；6将F1代双基因杂合子小鼠配繁并进行基因型鉴定，筛选获得F2代纯合子小鼠，即为所述条件性敲除Mcpt8基因小鼠。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东医科大学附属医院 一种嗜碱性粒细胞缺失小鼠模型及其构建方法与应用
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