申请/专利权人：深圳市大道测序生物科技有限公司

申请日：2023-02-20

公开（公告）日：2024-06-25

公开（公告）号：CN116287167B

主分类号：C12Q1/6874

分类号：C12Q1/6874

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.25#授权;2024.06.21#著录事项变更;2023.07.11#实质审查的生效;2023.06.23#公开

摘要：本发明提供一种核酸分子的测序方法。本发明在测序的过程中，基于两组核苷酸的特定标识，针对测序模板同一待测位点，通过形成五元络合物的形式在待测位点引入第一组核苷酸中具有预设标识的核苷酸，获得第一标识信息，然而再在同一位点以共价延伸的形式引入第二组核苷酸中具有预设标识的核苷酸，获得第二标识信息，将第一标识信息、第二标识信息采用二进制进行双重确认，提高碱基识别的准确率。本发明的测序方法，基于两组核苷酸的预设标识进行识别，能够通过简单的单激发光源和单色光路系统硬件测序仪器实现，成本低。

主权项：1.一种核酸分子的测序方法，其特征在于，所述测序方法包括如下步骤：提供第一组核苷酸，所述第一组核苷酸中与测序模板待测位点配对的核苷酸、所述测序模板、测序引物、第一核酸聚合酶和非催化竞争金属离子反应形成非共价五元络合物；所述第一组核苷酸包括第一dATP或其类似物、第一dTTP或其类似物、第一dCTP或其类似物和第一dGTP或其类似物，且每种核苷酸或其类似物各自独立地具有预设标识；检测所述非共价五元络合物中对应含有的预设标识，获取第一标识信息；将所述非共价五元络合物打散，保留所述测序模板和所述测序引物，用于与第二组核苷酸、第二核酸聚合酶和催化竞争金属离子进行共价延伸；所述第二组核苷酸包括第二dATP或其类似物、第二dTTP或其类似物、第二dCTP或其类似物和第二dGTP或其类似物，且每种核苷酸或其类似物具有可逆终止子结构并各自独立地具有预设标识；检测共价延伸所得产物中对应含有的预设标识，获取第二标识信息；将所述第一标识信息和第二标识信息以二进制组合，根据所得组合信息明确所述配对核苷酸的种类，从而确定待测位点的核苷酸的种类；其中，所述第一组核苷酸和所述第二组核苷酸满足的条件包括：如下定义的组合标识1、组合标识2、组合标识3和组合标识4彼此不同；组合标识1为所述第一组核苷酸中第一dATP或其类似物的预设标识和所述第二组核苷酸中第二dATP或其类似物的预设标识；组合标识2为所述第一组核苷酸中第一dTTP或其类似物的预设标识和所述第二组核苷酸中第二dTTP或其类似物的预设标识；组合标识3为所述第一组核苷酸中第一dCTP或其类似物的预设标识和所述第二组核苷酸中第二dCTP或其类似物的预设标识；组合标识4为所述第一组核苷酸中第一dGTP或其类似物的预设标识和所述第二组核苷酸中第二dGTP或其类似物的预设标识；所述预设标识包括标记和非标记；所述预设标识为标记，所述标识信息记作1，所述预设标识为非标记，所述标识信息记作0，以1和0进行二进制组合；所述测序方法还包括确定所述待测位点的核苷酸的种类之后，切除所述可逆终止子结构，对所述待测位点的下一位点的核苷酸的种类进行确定；确定所述下一位点的核苷酸的种类的方法与确定所述待测位点的核苷酸的种类的方法相同。

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