申请/专利权人：广东一方制药有限公司;国药集团广东环球制药有限公司

申请日：2018-12-21

公开（公告）日：2021-10-26

公开（公告）号：CN109374785B

主分类号：G01N30/02(20060101)

分类号：G01N30/02(20060101);G01N30/36(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.10.26#授权;2019.03.19#实质审查的生效;2019.02.22#公开

摘要：本发明涉及一种淡竹叶药材UPLC特征图谱构建方法和检测方法。该特征图谱构建方法包括如下步骤：以异荭草苷和日当药黄素为对照品制备对照品参照物溶液；以淡竹叶对照药材制备对照药材参照物溶液；分别取淡竹叶药材和标准汤剂样品，加提取溶剂提取，过滤，所得滤液作为供试品溶液和标准汤剂供试品溶液；分别吸取所述对照品参照物溶液、供试品溶液、标准汤剂供试品溶液，注入超高效液相色谱仪，测定；比较所得供试品图谱与标准汤剂供试品图谱，标定了4个水溶性成分的特征峰，获得淡竹叶药材的UPLC特征图谱。该特征图谱能用于定性、定量分析淡竹叶药材的质量，能够确保采用该药材制备的淡竹叶传统汤剂的质量，也适用于检测含淡竹叶的其它制剂。

主权项：1.一种淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以异荭草苷和日当药黄素为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向淡竹叶对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液定容，滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向淡竹叶药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液I，将所述提取液I定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向淡竹叶标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声处理，得提取液II，将所述提取液II定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：分别将所述对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、供试品溶液I和供试品溶液II注入超高效液相色谱仪，测定，标定水溶性共有峰，得到淡竹叶药材UPLC特征图谱；所述超高效液相色谱的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-2min，保持流动相A的体积分数为10％，保持流动相B的体积分数90％；2min-3min，流动相A的体积分数由10％升高到16％，流动相B的体积分数由90％降低到84％；3min-7.5min，保持流动相A的体积分数为16％，保持流动相B的体积分数为84％；7.5min-16min，流动相A的体积分数由16％升高到52％，流动相B的体积分数由84％降低到48％。

全文数据：淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法技术领域本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一种淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法。背景技术淡竹叶为禾本科植物淡竹叶LophatherumgracileBrongn.的干燥茎叶。夏季未抽花穗前采割，晒干。有清热泻火、除烦止渴、利尿通淋之功效。淡竹叶始载于《滇南本草》，明代李时珍在《本草纲目》称它：甘、寒、无毒、去烦热、利小便、清心。目前，淡竹叶已知的化学成分主要以黄酮类为主，此外还包括挥发油类、三萜类、酚酸、多糖、氨基酸等。现代药理证明，淡竹叶有解热、利尿、抗菌作用，临床上常用于治疗热病烦渴、口舌生疮、牙龈肿痛、小儿惊啼、肺热咳嗽、胃热呕哕、小便赤涩淋浊等证。除可做药用外，淡竹叶还可用于食品保健品等领域，近几年随着凉茶的发展，年用量也随之增加。其具有较强的临床应用价值，市场需求广阔，被开发成中药配方颗粒及相关复方制剂广泛用于临床。中药的临床使用多以传统汤剂为主。中药汤剂的物质基础，是中医理论指导下防治疾病的基础。现行的法定标准仅针对单一成分进行定量控制，量效关系不能全面反映中药成分的整体作用。在现阶段，中药绝大多数有效成分未明确的情况下，中药特征图谱特征图谱的建立能大大提高中药质量控制的技术水平及科技含量。《中国药典》2015年版没有建立淡竹叶的含量测定项。目前文献研究报道的关于淡竹叶特征图谱的建立，均只针对药材原料，指标成分多以脂溶性成分为研究对象，主要用于中药材真伪、产地、品质差异的定性鉴别，较难全面反映淡竹叶的质量特征，也不能反应传统中药汤剂的物质基础特征。发明内容基于此，本发明提供一种淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法。构建的淡竹叶药材的特征图谱具有4个水溶性成分的特征峰，可以快速、全面实现对淡竹叶药材多个特征成分的质量监控，并能反应淡竹叶的传统中药汤剂的物质基础特征。具体技术方案为：一种淡竹叶药材特征图谱的构建方法，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以异荭草苷和日当药黄素为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向淡竹叶对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液定容，滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向淡竹叶药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液I，将所述提取液I定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向淡竹叶标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声处理，得提取液II，将所述提取液II定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：分别将所述对照品参照物溶液、对照药材参照参照物溶液、供试品溶液I和供试品溶液II注入超高效液相色谱仪，测定，标定水溶性共有峰，得到淡竹叶药材UPLC特征图谱。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-2min，保持流动相A的体积分数为10％，保持流动相B的体积分数90％；2min-3min，流动相A的体积分数由10％升高到16％，流动相B的体积分数由90％降低到84％；3min-7.5min，保持流动相A的体积分数为16％，保持流动相B的体积分数为84％；7.5min-16min，流动相A的体积分数由16％升高到52％，流动相B的体积分数由84％降低到48％。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温30℃-40℃，流速为每分钟0.1mL-0.5mL，检测波长为340nm-360nm。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，柱温30℃，流速为每分钟0.25mL，检测波长为350nm。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为50％-70％的乙醇水溶液。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为60％的乙醇水溶液。在其中一个实施例中，所述超声处理的时间为20min-40min。本发明还提供一种淡竹叶药材的检测方法。具体技术方案为：一种淡竹叶药材的检测方法，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以异荭草苷和日当药黄素为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向淡竹叶对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液定容，滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；待测样品溶液的制备：向待测样品中加入提取溶剂，超声处理，得提取液III，将所述提取液III定容，滤过，取续滤液作为待测样品溶液；测定：将所述对照品参照物溶液、对照药材参照参照物溶液、待测样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定，即可。在其中一个实施例中，供试品溶液的制备中，所述淡竹叶药材包含有不同产地的淡竹叶药材，本发明的供试品原料来自全国淡竹叶产量较大的6个道地或主要产区，共18批次样品，具有充分的代表性。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱检测的色谱条件包括：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-2min，保持流动相A的体积分数为10％，保持流动相B的体积分数90％；2min-3min，流动相A的体积分数由10％升高到16％，流动相B的体积分数由90％降低到84％；3min-7.5min，保持流动相A的体积分数为16％，保持流动相B的体积分数为84％；7.5min-16min，流动相A的体积分数由16％升高到52％，流动相B的体积分数由84％降低到48％。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱温30℃-40℃，流速为每分钟0.1mL-0.5mL，检测波长为340nm-360nm。在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件为：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％的磷酸水溶液，柱温30℃，流速为每分钟0.25mL，检测波长为350nm。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为50％-70％的乙醇水溶液。在其中一个实施例中，所述提取溶剂为体积分数为60％的乙醇水溶液。在其中一个实施例中，所述超声处理的时间为20min-40min。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明采用超高效液相色谱UPLC法构建淡竹叶药材的特征图谱，引入淡竹叶标准汤剂的特征图谱进行研究，针对淡竹叶标准汤剂与淡竹叶药材共有的水溶性特征成分进行研究采用UPLC-MS和相关对照品确认了4个共有特征峰的成分，分别为犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷、异荭草苷、日当药黄素和木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-α-L-阿拉伯糖苷，并作为淡竹叶药材特征图谱特征峰确定的依据，能够很好的表征药材原料到汤剂的物质传递，不仅能够很好的把控药材质量，而且也能够确保汤剂的质量；同时，采用了对照品、对照药材双重对照，可以有效克服液相条件指纹图谱固有存在的耐用性偏差问题，比较更加全面。采用本发明的色谱条件，能够实现淡竹叶药材特征图谱中的4个共有特征峰较好的分离，特征图谱信息丰富，特征性强。并以含量测定峰异荭草作为参照峰，规定其他3个特征峰的相对保留时间和相对峰面积限量范围，实现多个特征成分的定量化，符合中药的整体作用理念。本发明采用了UPLC法，与常规HPLC法相比，更加高效、快速、环保；采用本发明构建的特征图谱及方法，重现性好，准确可靠，可以快速、全面实现对淡竹叶药材多个特征成分的质量监控，既提升了淡竹叶药材的质量控制水平，又提升和稳定淡竹叶药材的内在质量，为临床提供符合淡竹叶标准汤剂要求的原料，为淡竹叶相关的制剂工艺生产过程提供重要的多指标参数依据。附图说明图1为不同波长下淡竹叶药材的特征图谱；图2为全波长扫描下淡竹叶药材的特征图谱；图3为不同提取溶剂下淡竹叶药材的特征图谱；图4为不同提取溶剂下淡竹叶药材特征图谱中总峰面积称样量的对比柱形图；图5为17批淡竹叶药材特征图谱峰1：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷；峰2S：异荭草苷；峰3：日当药黄素；峰4：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-α-L-阿拉伯糖苷；图6为17批淡竹叶标准汤剂特征图谱；图7为淡竹叶标准汤剂特征图谱；图8为淡竹叶药材、淡竹叶标准汤剂特征图谱；图9为淡竹叶药材对照特征图谱；图10为淡竹叶药材、淡竹叶对照药材参照物特征图谱对比图；图11为各对照品的特征图谱与淡竹叶特征图谱的对比一图；图12为各对照品的特征图谱与淡竹叶特征图谱的对比二图；图13为待测样品的特征图谱。具体实施方式以下结合具体实施例对本发明的淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法和检测方法作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。实施例1淡竹叶药材特征图谱的构建1、仪器、试剂与试药仪器如表1所示，试剂如表2所示，试药如表3所示：表1表2表32、研究对象本实施例淡竹叶药材来自全国淡竹叶产量较大的7个道地或主要产区共17批次样品，具体见表4：表4备注：异荭草苷含量是按《香港中药材标准》的淡竹叶项下含量测定方法测定。3、对照品参照物溶液、对照药材参照物溶液、标准汤剂的制备取异荭草苷对照品10mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，精密量取1mL，置20mL量瓶中，用体积分数为30％的乙醇水溶液稀释至刻度，制成每1mL含10μg异荭草苷的溶液，即得异荭草苷对照品参照物溶液。取日当药黄素对照品10mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，精密量取1mL，置20mL量瓶中，用体积分数为30％的乙醇水溶液稀释至刻度，制成每1mL含10μg日当药黄素的溶液，即得日当药黄素对照品参照物溶液。对照药材参照物溶液：取1.0g淡竹叶对照药材粉末，精密称定，置50mL量瓶中，加入60％体积分数乙醇水溶液适量，超声处理功率500W，频率40HKz10分钟，取提取液，将所述提取液放冷，用60％体积分数乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为淡竹叶对照药材参照物溶液。标准汤剂：取淡竹叶药材，拣选除杂，切段1-2cm，得淡竹叶饮片；取饮片100g，加水煎煮二次，第一次煎煮加15倍量水，浸泡30分钟后，先武火煮沸后再文火保持微沸煎煮20分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速用冷水冷却；第二次煎煮加13倍量水，先武火煮沸后再文火保持微沸煎煮15分钟，用350目筛网趁热过滤，滤液迅速冷水冷却，合并两次滤液。减压浓缩温度：65℃，转速：70-90转分钟，真空度：-0.08～-0.1MPa至清膏含固率为15％左右；分装至西林瓶中，每瓶分装2ml，真空冷冻干燥，取出，轧铝盖即得。4、色谱条件4.1色谱条件确定为：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％体积分数的磷酸水溶液，梯度洗脱，梯度条件如表5所示，色谱柱为CORTECST3柱柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm，柱温为30℃，流速为每分钟0.25mL，检测波长为350nm。上述色谱条件下，淡竹叶药材的特征图谱中特征峰信息较完整，且分离度较好。表54.2检测波长的确定通过全波长扫描，考察淡竹叶药材不同色谱波长的峰情况，通过移动波长，考察不同波长下的色谱峰信息，选择最后检测波长。具体方法如下：取0.1g淡竹叶药材粉末批号：DZY04，精密称定，置50mL量瓶中，加入60％体积分数乙醇水溶液适量，超声处理功率500W，频率40HKz10分钟，取提取液，将所述提取液放冷，用60％体积分数乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，将上述供试品溶液注入色谱仪，记录190～400nm范围内的吸收光谱，如图1和图2所示。图1和图2结果表明：波长为350mm处，各峰的整体响应较好，干扰较少，选择350mm为检测波长。5、供试品溶液的制备5.1提取溶剂的选择分别选取甲醇、50％体积分数甲醇水溶液、30％体积分数乙醇水溶液、60％体积分数乙醇水溶液和水作为提取溶剂，通过暂时指认4个色谱峰总峰面积称样量及色谱图来比较不同提取溶剂特征图谱结果。具体方法为：取1.0g淡竹叶粉末过四号筛，批号：DZY04，平行5份，精密称定，置50mL量瓶中，分别加入甲醇、50％体积分数甲醇水溶液、30％体积分数乙醇水溶液、60％体积分数乙醇水溶液和水适量，超声处理功率500W，频率40kHZ30分钟，取提取液，将所述提取液放冷，用相应溶剂定容至刻度线，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。采用4.1中的色谱条件，对不同溶剂提取的淡竹叶药材的供试品溶液进行UPLC测试，得到5个淡竹叶药材的特征图谱，如图3所示，其总峰面积称样量如表6和图4所示。表6实验结果：通过对比5种不同溶剂提取的淡竹叶药材的特征图谱可发现：60％体积分数乙醇水溶液作为提取溶剂时，总峰面积称样量为最大，提取效率优于其他四种溶剂，且峰型较好，毒性较低，故选取60％体积分数乙醇水溶液作为提取溶剂。5.2确定供试品溶液的制备方法如下：取1.0g淡竹叶粉末过四号筛，精密称定，置50mL量瓶中，加入60％体积分数乙醇水溶液适量，超声处理功率250W，频率40kHz30分钟，取提取液，将所述提取液放冷，用60％体积分数乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。6、淡竹叶药材特征图谱特征峰的确定17批淡竹叶药材，按5.2中的供试品溶液的制备方法，制备17批淡竹叶药材的供试品溶液I，按4.1中的色谱条件对上述17批淡竹叶药材供试品溶液I进行UPLC测定，得到17批淡竹叶药材特征图谱。参见图5。另取17批淡竹叶标准汤剂样品适量，按5.2中的供试品溶液的制备方法，制备17批淡竹叶标准汤剂样品的供试品溶液II，按4.1中的色谱条件对上述17批淡竹叶标准汤剂样品的供试品溶液II进行UPLC测定，得到17批淡竹叶标准汤剂特征图谱。参见图6。实验结果表明：17批淡竹叶药材特征图谱具有4个特征峰，且所述4个特征峰均能从淡竹叶药材稳定转移到淡竹叶标准汤剂中。即淡竹叶药材特征图谱与标准汤剂特征图谱中的4个特征峰相对应，因此，选择此4个特征峰为对叶百部药材的共有峰，并以峰2异荭草苷为参照峰进行标准研究。详情参见图7、图8。7、方法学验证稳定性考察精密吸取淡竹叶药材DZY04，采用5.2中的供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，采用4.1中的色谱条件，进行UPLC测定，分别在0，4，8，12，16，20，24小时进样，以异荭草苷峰为参照峰，计算相对保留时间及相对峰面积，结果见表7和表8。表7特征图谱稳定性结果相对保留时间表8特征图谱稳定性结果相对峰面积实验结果显示：24小时内，供试品溶液各色谱相对保留时间相对峰面积RSD小于2％，表明供试品溶液在24小时内稳定。8、淡竹叶药材特征图谱的确定1对17批淡竹叶药材特征图谱进行分析，以峰2异荭草苷峰为参照峰，计算各峰相对保留时间及相对峰面积，实验结果见表9-表12。表917批淡竹叶药材特征图谱保留时间表1017批淡竹叶药材特征图谱相对保留时间表1117批淡竹叶药材特征图谱峰面积表1217批淡竹叶药材特征图谱相对峰面积结果显示，淡竹叶药材有4个特征峰较为稳定，与淡竹叶标准汤剂特征图谱共有峰一致。以峰2异荭草苷峰为参照峰，17批淡竹叶药材特征图谱的其余3个特征峰相对保留时间RSD值在0.05％～1.44％，均小于2.0％，符合淡竹叶药材特征图谱的标准要求；17批淡竹叶药材特征图谱的3个特征峰相对峰面积的RSD在23.83％～57.18％。结果表明不同产地淡竹叶药材的各特征峰面积存在一定差异，峰1相对峰面积范围为1.008～2.349，峰3相对峰面积范围为0.085～1.882，峰4相对峰面积范围为0.043～1.729。为严格控制淡竹叶药材的质量，为淡竹叶制剂，如淡竹叶标准汤剂和配方颗粒的制备提供质优且稳定的原料药材，对淡竹叶药材指纹图谱的特征峰相对峰面积设定限量标准，是非常必要的。根据17批次不同产地淡竹叶药材的峰2与其他3个峰的相对峰面积波动范围，考虑17批次不同产地样品的代表性，取各特征峰相对峰面积最低、最高值，因此，暂定淡竹叶药材特征图谱的标准为：供试品色谱中应呈现4个特征峰，并应与淡竹叶药材对照特征图谱中的4个特征峰保留时间相对应；与异荭草苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.866峰1、1.046峰3、1.195峰4。计算各特征峰与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定范围内，规定范围为：1.0～2.3峰1、0.08～1.9峰2、0.04～1.7峰3。2特征图谱标准的拟定将17批淡竹叶药材特征图谱使用《中药色谱特征图谱相似度评价软件》匹配，生成对照图谱，建立淡竹叶药材对照特征图谱，如图9所示。暂定淡竹叶药材特征图谱的标准为：供试品色谱中应呈现4个特征峰，并应与淡竹叶药材对照特征图谱中的4个特征峰保留时间相对应；与异荭草苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.866峰1、1.046峰3、1.195峰4。计算各特征峰与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定范围内，规定范围为：1.0～2.3峰1、0.08～1.9峰2、0.04～1.7峰3。9、特征峰的指认利用UPLC-MSMS对淡竹叶特征图谱上的特征峰进行化学指认，确定其化学成分。一仪器与试药WatersACQUITYUPLCTMI-Class型超高效液相色谱仪；沃特世超高效液相飞行时间高分辨质谱联用系统XevoG2-XSQTOFMS，数据处理系统为UNIFI1.8工作站Waters,Manchester,U.K.；CortecsT32.1*100mm，1.6μm色谱柱。T-114万分之一天平北京赛多利斯仪器系统有限公司；KQ-3000E超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司；Direct-Q5型超纯水机美国Millipore公司。二液相条件色谱条件同4.1。三质谱条件氮气作为质谱离子源的雾化、锥孔气；电喷雾电离正离子模式；毛细管电压：2.0KV；锥孔电压：40V；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：450℃；脱溶剂气流速：800Lh；扫描时间：0.5s；扫描时间间隔：0.02s；质荷比范围：50～1200；数据采集模式：ESI-下采集MSE；以甲酸钠溶液校正质量轴，以亮氨酸脑啡肽Leucine-enkephalin为内标校正质量精度，锥孔气体流量：50Lhr。四供试品溶液、对照药材参照物溶液的制备供试品溶液的制备同5.2。对照药材参照物溶液的制备同3。五实验目的采用上述的色谱和质谱分析方法，对供试品溶液进行检测。通过化合物的色谱峰保留行为、精确分子量，鉴定淡竹叶的紫外色谱图中峰1、3、4对应化合物。图10为淡竹叶药材的特征图谱与对照药材参照物的对比图，指认了多个特征峰，包括峰1：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷；峰2：异荭草苷；峰3：日当药黄素；峰4：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-α-L-阿拉伯糖苷。六实验结果根据文献及指认报告显示淡竹叶中存了木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷、日当药黄素、异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷和绿原酸等，MS指认报告显示最大的峰是木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷，却因买不到对照，无法进行确认。其它能购买的对照品有：日当药黄素、异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷和绿原酸对照品，对照品信息如表14所示，按照3制备各对照品参照物溶液，对各对照品参照物溶液进行UPLC检测，结果如图11、12所示，发现淡竹叶中几乎没有绿原酸；荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷峰响应都很弱，且不稳定，故特征图谱中只确定日当药黄素和异荭草苷峰为已知峰。表14七特征峰归属最终确定图9中的共有特征峰归属如下：峰1：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-β-D-葡萄糖苷；峰2S：异荭草苷*；峰3：日当药黄素*；峰4：木犀草素6-C-βD-六碳糖醛酸基1→2-α-L-阿拉伯糖苷*用对照品确认实施例2淡竹叶药材的检测方法本实施例提供一种淡竹叶药材的检测方法，步骤如下：1色谱条件同实施例1中的4.1。2对照品参照物溶液的制备同实施例1中3。3待测样品溶液的制备取待测样品1.0g批号：DZY18，按中国药典全检合格，置50mL容量瓶中，加60％体积分数乙醇水溶液适量，超声处理功率500W，频率40kHz30分钟，取提取液，将所述提取液放冷，用60％体积分数乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为待测样品溶液。3测定精密吸取待测样品溶液1μl，注入液相色谱仪，测定。结果分析与讨论待测样品的特征图谱如图13所示，与图9对比可知，待测样品的特征图谱没有特征峰4，进一步对比待测样品特征图谱与图9特征峰的相对保留时间和相对峰面积，如表15、16所示。表15DZY18特征图谱与淡竹叶药材特征图谱的比较相对保留时间表16DZY18特征图谱与淡竹叶药材特征图谱的比较相对峰面积由图13、表15-16可知，批号为DZY18的淡竹叶药材与其他17批淡竹叶药材的对照特征图谱差异较大，主要体现在批号为DZY18的淡竹叶药材不具有峰4。表16显示，两者的相对峰面积差异显著，由前研究17批次样品建立的对照特征图谱及规定的相对峰面积限量，可以有效区分淡竹叶样品，批号为DZY18的药材为伪品。进一步说明本实施例所述的淡竹叶药材的检测方法具有鉴别力，能够从源头上控制药材，并对单方制备的颗粒进行鉴别，为淡竹叶研究提供了基础，增强了淡竹叶配方颗粒所用原料的整体质量把控。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

权利要求：1.一种淡竹叶药材UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以异荭草苷和日当药黄素为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向淡竹叶对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液定容，滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；供试品溶液的制备：向淡竹叶药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液I，将所述提取液I定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液I；向淡竹叶标准汤剂样品中加入提取溶剂，超声处理，得提取液II，将所述提取液II定容，滤过，取续滤液作为供试品溶液II；测定：分别将所述对照品参照物溶液、对照药材参照参照物溶液、供试品溶液I和供试品溶液II注入超高效液相色谱仪，测定，标定水溶性共有峰，得到淡竹叶药材UPLC特征图谱。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-2min，保持流动相A的体积分数为10％，保持流动相B的体积分数90％；2min-3min，流动相A的体积分数由10％升高到16％，流动相B的体积分数由90％降低到84％；3min-7.5min，保持流动相A的体积分数为16％，保持流动相B的体积分数为84％；7.5min-16min，流动相A的体积分数由16％升高到52％，流动相B的体积分数由84％降低到48％。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温30℃-40℃，流速为每分钟0.1mL-0.5mL，检测波长为340nm-360nm。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述提取溶剂为体积分数为50％-70％的乙醇水溶液。5.根据权利要求1-4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述超声处理的时间为20min-40min。6.一种淡竹叶药材的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：参照物溶液的制备：分别以异荭草苷和日当药黄素为对照品，加溶剂溶解，制备对照品参照物溶液；向淡竹叶对照药材中加入提取溶剂，超声处理，得提取液，将所述提取液定容，滤过，取续滤液作为对照药材参照物溶液；待测样品溶液的制备：向待测样品中加入提取溶剂，超声处理，得提取液III，将所述提取液III定容，滤过，取续滤液作为待测样品溶液；测定：将所述对照品参照物溶液、对照药材参照参照物溶液、待测样品溶液注入超高效液相色谱仪，测定，即可。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱检测的色谱条件包括：固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.05％-0.2％的磷酸水溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：0-2min，保持流动相A的体积分数为10％，保持流动相B的体积分数90％；2min-3min，流动相A的体积分数由10％升高到16％，流动相B的体积分数由90％降低到84％；3min-7.5min，保持流动相A的体积分数为16％，保持流动相B的体积分数为84％；7.5min-16min，流动相A的体积分数由16％升高到52％，流动相B的体积分数由84％降低到48％。8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：柱温30℃-40℃，流速为每分钟0.1mL-0.5mL，检测波长为340nm-360nm。9.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述提取溶剂为体积分数为50％-70％的乙醇水溶液。10.根据权利要求6-9任一项所述的检测方法，其特征在于，所述超声处理的时间为20min-40min。

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