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申请/专利权人：陕西科技大学
申请日：2022-03-25
公开（公告）日：2024-05-24
公开（公告）号：CN114621999B
主分类号：C12Q1/6825
分类号：C12Q1/6825;C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.05.24#授权;2022.07.01#实质审查的生效;2022.06.14#公开
摘要：本发明公开了一种用于检测羊乳掺假的CRISPRCas12a介导的拉曼传感器及其检测羊乳掺假的方法和应用，属于分析化学和食品安全领域。该拉曼传感器包括单链DNA‑普鲁士蓝纳米颗粒探针、由CRISPRCas12a蛋白、crRNA、缓冲液以及提取扩增后的羊乳样品DNA构成的Cas12a酶切反应体系、含氢氧根的溶液以及作为拉曼增强基底的金核银壳纳米颗粒溶液。将该拉曼传感器应用于羊乳中掺假成分为牛乳的检测中，目标DNA含量可以经拉曼光谱仪检测转化为超灵敏、抗干扰的拉曼信号。该拉曼传感器及其方法对目标DNA的检出限可达到aM级别，目标DNA的设计选取灵活，以牛线粒体cytb基因为目标DNA，能够应用于羊乳中的掺假成分为牛乳的检测中，具有快速、灵敏、准确以及背景干扰低等优点。
主权项：1.一种用于检测羊乳掺假的CRISPRCas12a介导的拉曼传感器，其特征在于，包括单链DNA-普鲁士蓝纳米颗粒探针、Cas12a酶切反应体系、含氢氧根的溶液以及作为拉曼增强基底的金核银壳纳米颗粒溶液；其中，所述单链DNA-普鲁士蓝纳米颗粒探针中，单链DNA的5’端修饰生物素，3’端修饰氨基，单链DNA的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示；所述Cas12a酶切反应体系由CRISPRCas12a蛋白、crRNA、缓冲液以及提取扩增后的羊乳样品DNA构成，其中，crRNA的识别序列与牛线粒体基因cytb上的片段互补，牛线粒体基因cytb上的片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.9所示；所述crRNA的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.8所示；所述扩增为环介导等温扩增，环介导等温扩增所用引物包括牛-FIP引物、牛-BIP引物、牛-F3引物和牛-B3引物，所述牛-FIP引物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示，牛-BIP引物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.5所示，牛-F3引物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示，牛-B3引物的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 陕西科技大学 一种用于检测羊乳掺假的CRISPR/Cas12a介导的拉曼传感器及其检测羊乳掺假的方法和应用
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