申请/专利权人：上海健士拜生物科技有限公司;澳斯康生物(南通)股份有限公司;甘肃健顺生物科技有限公司;健顺生物科技(南通)有限公司

申请日：2022-02-16

公开（公告）日：2024-05-31

公开（公告）号：CN114480286B

主分类号：C12N5/09

分类号：C12N5/09;C12N5/071;C12N5/02;C12N7/00;C12N7/02;A61K39/15;A61K39/155;A61K39/215;A61K39/235;A61K39/145;A61P31/20;A61P31/14;A61P31/16

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.31#授权;2022.05.31#实质审查的生效;2022.05.13#公开

摘要：本发明提供一种无血清悬浮型LMH细胞系及其制备方法和应用。本发明采用添加氨基酸、维生素、无机盐、微量元素以及其他成分的DMEMF12培养基的无血清培养基配方制备无血清悬浮型LMH细胞系，该无血清培养基配方能够用于贴壁培养型LMH细胞传代培养，经过逐代传代培养使其能适应采用该无血清培养基配方进行悬浮培养的方式，有助于LMH细胞的规模化生产，有利于病毒的复制和表达，促进病毒疫苗的规模化生产。

主权项：1.一种家禽病毒疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：制备家禽病毒的步骤和将所述家禽病毒制备成疫苗的步骤，制备所述家禽病毒的步骤包括：采用无血清培养基对贴壁培养型LMH细胞进行传代培养制备无血清悬浮培养型LMH细胞系；采用所述的无血清悬浮培养型LMH细胞系为宿主细胞，接种家禽病毒，于所述无血清培养基中培养；所述无血清培养基包含DMEMF12培养基以及如下浓度的组分：L-丙氨酸444.8mgL、L-精氨酸盐酸盐160.7mgL、L-谷氨酸167.8mgL、L-谷氨酰胺584.6mgL、甘氨酸-118mgL、L-组氨酸盐酸盐水合物113.5mgL、L-异亮氨酸162.4mgL、L-亮氨酸166mgL、L-丝氨酸150.3mgL、L-苏氨酸138.5mgL、天冬酰胺一水合140.2mgL、天冬氨酸166.2mgL、L-半胱氨酸一水合物310.8mgL、L-赖氨酸盐酸盐104mgL、甲硫氨酸109.1mgL、L-苯丙氨酸110.2mgL、L-脯氨酸92.1mgL、L-色氨酸55.9mgL、L-缬氨酸77.2mgL、泛酸钙23.8mgL、氯化胆碱1.4mgL、生物素0.733mgL、对氨基苯甲酸0.14mgL、抗坏血酸0.12mgL、生育酚0.25mgL、氯化钠4759.6mgL、无水硫酸镁733mgL、氯化钾175mgL、碳酸氢钠2940mgL、磷酸二氢钠1080mgL、磷酸氢二钠328mgL、亚硒酸钠2.77mgL、四水合钼酸铵1.24mgL、七水硫酸锌1.73mgL、葡萄糖4000mgL、β-巯基乙醇2.34mgL、丙酮酸钠300mgL、重组人胰岛素4.5mgL，和PluronicF-681000mgL；或者，所述无血清培养基包含DMEMF12培养基以及如下浓度的组分：L-丙氨酸400mgL、L-精氨酸盐酸盐120mgL、L-谷氨酸100mgL、L-谷氨酰胺650mgL、甘氨酸80mgL、L-组氨酸盐酸盐水合物150mgL、L-异亮氨酸100mgL、L-亮氨酸200mgL、L-丝氨酸110mgL、L-苏氨酸-200mgL、天冬酰胺一水合物100mgL、天冬氨酸200mgL、L-半胱氨酸一水合物400mgL、L-赖氨酸盐酸盐200mgL、甲硫氨酸50mgL、L-苯丙氨酸170mgL、L-脯氨酸120mgL、L-色氨酸40mgL、L-缬氨酸100mgL、泛酸钙10mgL、氯化胆碱1mgL、生物素0.5mgL、对氨基苯甲酸0.2mgL、抗坏血酸0.3mgL、生育酚0.1mgL、氯化钠4000mgL、无水硫酸镁850mgL、氯化钾220mgL、碳酸氢钠3200mgL、磷酸二氢钠1100mgL、磷酸氢二钠400mgL、亚硒酸钠4mgL、四水合钼酸铵0.5mgL、七水硫酸锌4.0mgL、葡萄糖3000mgL、β-巯基乙醇5mgL、丙酮酸钠400mgL、重组人胰岛素2mgL，和PluronicF-681500mgL；或者，所述无血清培养基包含DMEMF12培养基以及如下浓度的组分：L-丙氨酸133mgL、L-精氨酸盐酸盐187mgL、L-谷氨酸25mgL、L-谷氨酰胺1300mgL、甘氨酸5mgL、L-组氨酸盐酸盐水合物60mgL、L-异亮氨酸20mgL、L-亮氨酸88mgL、L-丝氨酸57mgL、L-苏氨酸60mgL、天冬酰胺一水合物80mgL、天冬氨酸67mgL、L-半胱氨酸一水合物150mgL、L-赖氨酸盐酸盐90mgL、甲硫氨酸1346mgL、L-苯丙氨酸20mgL、L-脯氨酸79mgL、L-色氨酸40mgL、L-缬氨酸74mgL、泛酸钙1mgL、氯化胆碱5mgL、生物素0.05mgL、对氨基苯甲酸0.2mgL、抗坏血酸0.01mgL、生育酚0.95mgL、氯化钠2200mgL、无水硫酸镁1800mgL、氯化钾790mgL、碳酸氢钠4200mgL、磷酸二氢钠129mgL、磷酸氢二钠744mgL、亚硒酸钠1.7mgL、四水合钼酸铵2mgL、七水硫酸锌4.1mgL、葡萄糖8000mgL、β-巯基乙醇25mgL、丙酮酸钠800mgL、重组人胰岛素2mgL，和PluronicF-68500mgL；所述家禽病毒包含H9亚型禽流感病毒、禽腺病毒、禽呼肠孤病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒和禽副粘病毒。

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