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申请/专利权人：青岛中仁动物药品有限公司
摘要：本发明涉及微生物应用技术领域，且公开了一种丁酸梭菌的筛选鉴定方法，所述丁酸梭菌的16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示，其鉴定步骤如下：S1：采集健康鸡的新鲜粪便，称取粪便样品加入三角瓶中振荡摇匀，静置后取上清液加入无菌水中，水浴加热杀死非芽孢菌。该丁酸梭菌的筛选鉴定方法及其发酵液和冻干粉制备，丁酸梭菌的丁酸产量不低于2.0gL；产淀粉酶，在淀粉酶选择性平板中形成的水解透明圈直径不小于1.2cm；产纤维素酶，在纤维素酶选择性平板中形成的水解透明圈直径不小于1.3cm；产蛋白酶，在蛋白酶选择性平板中形成的水解透明圈直径不小于0.8cm；对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌在内的多种肠道致病菌均有一定抑菌能力。
主权项：1.一种丁酸梭菌的筛选鉴定方法，其特征在于：所述丁酸梭菌的16SrDNA序列如SEQIDNO.1所示，其鉴定步骤如下：S1：采集健康鸡的新鲜粪便，称取粪便样品加入三角瓶中振荡摇匀，静置后取上清液加入无菌水中，水浴加热杀死非芽孢菌。S2：用无菌水将样品溶液继续10倍稀释至6个梯度，每个梯度分别取100μL涂布于TSN固体培养基上。待培养基完全凝固后，将平板装入含有厌氧产气包和氧气指示剂的厌氧培养袋中，37℃培养24h。S3：将TSN固体培养基上长出的单菌落进行镜检，观察菌落形态特征，选取符合丁酸梭菌形态特征的单菌落在RCM固体培养基上连续划线培养，直到获取形态基本一致的单菌落。S4：挑取筛选菌株的单菌落分别接种于TSN固体培养基和RCM固体培养基上，37℃厌氧培养24h，观察菌落在不同培养基上的形态，然后对筛选菌株进行革兰氏染色鉴定、生理生化试验鉴定。S5：通过特异性筛选丁酸梭菌的引物对符合要求的筛选菌株进行分子生物学复筛。S6：评价复筛出的丁酸梭菌的生长能力、产酶能力、抑菌能力和产酸能力。
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权利要求：
百度查询： 青岛中仁动物药品有限公司 一种丁酸梭菌的筛选鉴定方法及其发酵液和冻干粉制备
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