申请/专利权人：上海迈其生物科技有限公司

申请日：2024-05-06

公开（公告）日：2024-06-07

公开（公告）号：CN118147214A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/14;A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.06.25#实质审查的生效;2024.06.07#公开

摘要：本发明公开了一种新的生菜基因工程遗传转化方法，本发明涉及生物基因工程技术领域，一种新的生菜基因工程遗传转化方法，生菜基因工程遗传转化方法需要转入生菜的目标基因并构建携带目标基因的表达载体，选择球型生菜进行基因工程遗传转化试验，本发明的优点在于：通过在生菜茎组织用的侵染液中加入晶须，可以在进行振荡操作时更易破坏生菜茎组织的表皮细胞，使得农杆菌更易侵染进入生菜茎组织中，从而提高转化效率，通过将生菜茎组织进行预培的时间增加到5d，使生菜茎组织能够更有利于农杆菌的侵染和遗传基因的整合，通过降低加入农杆菌的OD值，可以有效地防止后面的农杆菌过度繁殖造成的农杆菌污染，使生菜茎组织不易出现侵染不完全的问题。

主权项：1.一种新的生菜基因工程遗传转化方法，其特征在于：所述生菜基因工程遗传转化方法需要转入生菜的目标基因并构建携带目标基因的表达载体，选择球型生菜进行基因工程遗传转化试验，所述一种新的生菜基因工程遗传转化方法具体操作步骤如下：步骤一、将球型生菜种子置于无菌环境中，将生菜的组培无菌苗作为基因工程遗传转化原材料，将生菜种子生长出的茎切下，在生长出的生菜茎上横切3刀，制备出生菜种子的茎组织，处理完成后将其保存在无菌环境中备用；步骤二、制备生菜茎组织所需要用的预培培养基，将MS基础培养基、乙酰丁香酮、羧苄西林、琼脂、PVP（聚乙烯吡咯烷酮）和蒸馏水混合搅拌制得预培培养基，使用头孢噻肟对生菜茎组织充分清洗，洗去生菜茎组织表面的菌体，清洗完成后将其置入预培培养基中在黑暗条件下进行培养；步骤三、制备生菜茎组织所需要用的侵染液，将MS基础培养基、3%蔗糖溶液、6-苄腺嘌呤、ZT（生长素）和蒸馏水搅拌混合制得侵染液，加入NaOH溶液和HCl溶液将侵染液的pH调节至5.8，将制得的生菜茎组织放入侵染液中，浸泡10min，完成后将侵染液倒出，使用滤纸将生菜茎组织上的残留液体吸附干净，并在无菌环境下保存备用；步骤四、制备生菜茎组织所需要用的共培培养液，将MS基础培养基、3%蔗糖溶液、二氯苯氧乙酸、卡那霉素、6-苄腺嘌呤和蒸馏水搅拌混合制得共培培养液，取3张滤纸用共培培养液浸湿，将生菜茎组织平铺在滤纸上方，并将其放置在黑暗条件下进行培养；步骤五、等到生菜茎组织培养完成，且愈伤诱导出来以后，制备愈伤组织所需的高浓度筛选抗性的培养基，高浓度筛选抗性的培养基由MS培养基、PVP、卡那霉素、6-苄腺嘌呤和蒸馏水搅拌混合制成，将已生长出的愈伤组织转到含有高浓度筛选抗性的培养基中进行筛选，并继续在恒温黑暗条件下进行培养，挑选生长良好的愈伤组织并将其切下，制备愈伤组织增殖分化培养基，其由MS培养基、3%蔗糖溶液、6-苄腺嘌呤、卡那霉素和蒸馏水搅拌混合制成，将切下的愈伤组织放在增殖分化培养基上，分化至其出芽，当芽生长出5mm后，将其切下后继续放在增殖分化培养基上进行培养；步骤六、对培养完成后的生菜茎组织生长出的幼苗进行抗性检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海迈其生物科技有限公司 一种新的生菜基因工程遗传转化方法

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