申请/专利权人：复旦大学

申请日：2023-03-19

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN117264791B

主分类号：C12N1/19

分类号：C12N1/19;C12N15/81;C12N9/88;C07K14/08;C07K14/01;C12N9/18;C07K14/47;C07K14/805;C12N9/34;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体为一种高效重组表达外源蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株及其应用。本发明提供的马克斯克鲁维酵母工程菌株，是以马克斯克鲁维酵母FIM1作为出发菌株，在FIM1的染色体上添加16个loxPsym位点，通过Cre重组酶处理，然后在46℃高温压力下进行筛选获得突变菌株，记为FDHY23；该突变菌株至少携带腺苷酸环化酶基因的突变。该突变菌株FDHY23可重组表达不同外源蛋白，表达水平提高了1.6～5.5倍，在高温下依然具有表达外源蛋白的能力。

主权项：1.一种高效表达外源蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株，其特征在于，是以保藏编号为CGMCCNo.10621的马克斯克鲁维酵母FIM1作为出发菌株，利用基因组编辑技术删除马克斯克鲁维酵母FIM1基因组上的基因URA3；利用基因编辑技术，在该ura3缺陷菌株的8条染色体上，分别选择2个位点整合loxPsym序列，获得菌株，命名为LHP1044，该菌株的染色体上包含16个loxPsym序列；将Cre重组酶基因连接到载体上，获得重组质粒LHZ893，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；用酵母醋酸锂转化方法，将重组质粒LHZ893转化菌株LHP1044后，在46℃高温压力下筛选获得具有明显生长优势的突变菌株，命名为FDHY23，保藏号CGMCCNo.26724，保藏日期：2023.3.3；所述16个loxPsym序列在染色体上整合的具体位置为：1号染色体的80654bp和297580bp，2号染色体的706654bp和885427bp，3号染色体的327216bp和1226714bp，4号染色体的715829bp和1172907bp，5号染色体的340152bp和746775bp，6号染色体的130814bp和446862bp，7号染色体的392737bp和674407bp，8号染色体的435906bp和606918bp；所述的马克斯克鲁维酵母FIM1的参考基因版本号为GCA_001854445.2。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 复旦大学 高效表达外源蛋白的马克斯克鲁维酵母工程菌株及其应用

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